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　　人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　實驗原理:

　　本試劑盒應用雙夾心法測定標本中Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)水平。用純化的Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)捕獲包被微孔板,制成固相,往包被的微孔中依次加入Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP),再與HRP標記的檢測結合,形成-抗原-酶標復合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)含量。

　　樣品采集:

　　收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存凝血因子IXELISA試劑盒

　　自備物品:

　　1 、 37 ℃ 恒溫箱

　　2 、 標準規(guī)格酶標儀

　　3 、 精密移液器及一次性吸頭

　　4 、 蒸餾水

　　5 、 一次性試管

　　6 、 吸水紙

　　人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒實驗使用說明書樣本處理及要求:

　　1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。

　　2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

　　3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

　　4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

　　5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

　　6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

　　7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3辣根過氧化物酶的(HRP)活性。